酪氨酸激酶小分子抑制剂及其抗瘤作用研究进展与肿瘤相关的酪氨酸激酶主要有位于细胞膜的受体酪氨酸激酶和位于胞浆的非受体酪氨酸激酶，酪氨酸激酶的过度激活与肿瘤发生、发展、预后与转归密切相关。酪氨酸激酶的过度激活，导致其下游信号途径的激活，最终导致细胞的转化、增殖和抵抗细胞凋亡、促进细胞生存。因此，许多学者致力于酪氨酸激酶抑制剂尤其是从特异性酪氨酸激酶抑制剂角度来研究新的抗肿瘤药物，并且已取得了巨大的突破，如针对Bcr-Abl的Gleevec、针对EGFR受体酪氨酸激酶Iressa，已被美国FDA批准分别用于慢性粒细胞性白血病和晚期非小细胞肺癌的治疗，效果显著。另外还有许多小分子抑制剂正在临床试验中，本实验室在HER2/neu和VEGFR受体酪氨酸激酶小分子抑制剂方面也进行一些研究，并取得一些有意义的结果。本文将对此新领域的研究进展作一综述。关键词：酪氨酸激酶；抗肿瘤药物；信号转导中图分类号：R730.231酪氨酸激酶分类与结构酪氨酸激酶分为受体酪氨酸激酶与非受体酪氨酸激酶两大类。受体酪氨酸激酶是一种具有跨膜结构的蛋白，其胞外区域能与配体结合，跨膜区以及胞内激酶区域。受体酪氨酸激酶的蛋白一级结构都已从其基因结构推知，而根据其结构可以将其分成几大类。主要有EGFR家族；PDGFR家族；FGFR家族；血管内皮生长因子受体；胰岛素受体家族；Trk受体；Tie受体；MET受体；Eph家族。非受体酪氨酸激酶主要有Src,Bcr-Abl,JAK等。Src属SFKs家族；Abl原癌基因编码一个细胞浆和核蛋白酪氨酸激酶，90%以上的慢性粒细胞性白血病中，有t(9,22)转位，形成Bcr-Abl酪氨酸激活。JAK蛋白酪氨酸激酶家族是仅次于Src和Tec的第三大非受体酪氨酸激酶家族，共包括4个成员：Jak
1、Jak2、Jak3、Tyk2。Jak家族分子基金项目：国家自然科学基金（39900183；30171092,广东省自然科学基金重点项目(013126)和广东省科技计划项目2003C30101)联合资助。作者：朱孝峰，男（1970－），博士，副研究员在结构上可分为两大部分：C端是两个紧密连接的酪氨酸激酶活性样结构域，其中最靠近C端的一个是Jak激酶的催化活性区；而位于其N端的另一个激酶样结构域不具有酪氨酸激酶活性，认为它可能与其它信号分子结合。Jak激酶与细胞因子受体或其它偶联分子结合而活化，激活STAT信号途径，参与细胞的增殖、生长因子等的分泌。2酪氨酸激酶信号转导途径酪氨酸激酶受体与其相应的配体结合后，往往导致受体聚合，形成二聚体的受体。一般认为，受体形成二聚体的过程对其激活有重大意义。激活的受体向细胞内部传递信息有二种方式：1、蛋白磷酸化，
2、蛋白质－蛋白质之间的相互作用。首先是受体发现酪氨酸磷酸化，酪氨酸磷酸化后与接头蛋白结合如Grb2的SH2、3结构域（Src同源结构域2、3）。根据含有SH2或SH3区域的蛋白质的性质，可以把它们分成两类：一类蛋白质具有某种酶活性或已知的功能；而另一类则仅仅起连接作用。前者包括胞浆内存在的酪氨酸激酶（Src,Abl,Ayk,Csk）、磷脂酶Cγ、Ras-GAP、蛋白酪氨酸磷酸等。典型的起联接作用的第二类SH2/SH3蛋白是c-Crk、Grb2、Nck。还发现有些蛋白兼具有上述两种作用，异二聚体激活的另外一个途径是MAPK非依赖性的P70／P85S6K途径，此途径与PI3K偶联。与Ras-MAPK一样，P70／P85S6K途径也呈现增强。胞浆癌蛋白酪氨酸激酶如Src在病毒癌基因的作用下过度激活，Abl在Bcr与其偶联形成Bcr-Abl融合蛋白下过度激活与慢性粒细胞性白血病发生相关。蛋白酪氨酸激酶激活的主要下游信号途径是Ras/MAPK和PI3K/AKT信号途径，促进细胞增殖、转化，抵抗细胞凋亡，对肿瘤的发生、发展、转移、血管生成、药物的敏感性等相关。3酪氨酸激酶小分子抑制剂3.1酪氨酸激酶小分子抑制剂STI571Ph+染色体是慢性粒细胞性白血病的特征性改变，由9号和22号染色性长臂的转位所至，从而产生了一种融合蛋白Bcr-Abl，使该激酶长期处理激活状态。Bcr-Abl单独足够导致慢性粒细胞性白血病，且其酪氨酸激酶活性是其致癌所必需的，因此针对Bcr-Abl的小分子抑制剂应该是一个有效的高选择性的慢性粒细胞白血病治疗药物。STI571，又名CGP57148B，Gleevec，是由Novartis公司开发研制的针对Bcr-Abl的酪氨酸激酶的小分子抑制剂，2001年已被美国FDA正式批准应用于临床治疗慢性粒细胞性白血病。STI571能抑制Bcr-Abl酪氨酸激酶及其下游信号转导途径。大分子与小分子对接实验表明，STI571与ATP竞争结合于酪氨酸激酶的ATP结合袋中，使ATP不能与此激酶的ATP结合位点结合，从而抑制该激酶的活性。DrukerBJ等报导的临床研究证明STI571的副作用很小，主要为恶心、水肿和腹泻等，最大耐受剂量没有测出，在300mg或最高的剂量下，54例慢粒病人中有53例血象完全缓解，多数发生在治疗的第一个四周内，其中细胞遗传学反应有29例，17例为主要缓解，7例为完全缓解。STI571对慢粒治疗效果十分显著，但也发现对STI571耐药的病例，GorreME等研究发现对STI571耐药的慢粒病人主要是由于Bcr-Abl基因扩增或突变所至。尽管STI571被用于治疗Bcr-Abl相关的白血病，但它对PDGFR和c-kit酪氨酸激酶均有明显抑制作用。因此，STI571对这些激酶相关的肿瘤也有效果。C-kit激活性突变与罕见的胃肠间质肿瘤GIST相关，试验表明STI571在治疗GIST中有明显的效果。70%小细胞肺癌表达c-kit和其配体干细胞因子，STI571呈现抑制小细胞肺癌细胞株生长。用于该病的缓解后巩固治疗。慢性单核细胞白血病中呈现持续活性Tel-PDGFR融合蛋白酪氨酸激酶，胶质母细胞瘤与PDGF及其受体自分泌生长循环相关。STI571呈现能抑制这些肿瘤的生长。2.2EGFR受体家族抑制剂ZD1839，Gefitinib，也称为Iressa是由AstraZeneca公司开发的一个针对EGFR酪氨酸激酶的可口服的小分子抑制剂。SirotnacFM等研究表明，ZD1839单药最大耐受量下（150mg/kg）在裸鼠体内诱导上皮细胞肿瘤A431部分缓解，对不同程度EGFR表达的肿瘤A549、SKLC－16、TSU－PR1、PC－3的抑制作用为70－80％。I期临床研究结果可见ZD1839在体内的半衰期为27~41小时，病人对其耐受性很好，最常见的毒副作用为皮肤红疹、恶心、呕吐和腹泻，且这些毒副作用均易处理，Gefitinib口服吸收好，主要经P4503A4代谢，在给予50-700mg/d，稳态浓度在7-10天达到。对64例肿瘤病人的研究表明，最大耐受剂量为700mg/d，此剂量使血浆浓度达到体外＞90％抑制作用的浓度。在64例中，15例（23％）有效，非小细胞肺癌16例中2例（12.5％）有效。在进展期非小细胞肺癌化疗失败病例，每天给予250-500mg，有效率为11.8-8.8%，约40%呈现疾病相关的症状改善。机理研究可见，在A431异体移植瘤标本中，Gefitinib诱导剂量和时间依赖性c-fosmRNA的抑制。C-fosmRNA在给药后6小时抑制作用最强，36小时后，尚未恢复至正常水平。50或200mg/kg的gefitinib处理后，c-fosmRNA转录减少至对照的6%或0.4%。在人A431细胞和DiFi肿瘤细胞株中抑制生长的浓度Gefitinib也抑制MAPK活性。Gefitinib在非小细胞肺癌病人I期临床试验后皮肤穿刺检测发现MAPK表达明显减少，与增殖细胞减少相一致(Ki67减少和P27表达的增加)。在另一研究中，Gefitinib能破坏CDK2的调节延长细胞周期进展。Gefitinib诱导细胞周期停止于G1期在用药后72小时，同时P27明显上调和CDK2活性下降。Gefitinib也抑制抗凋亡AKT/NFkB途径。Gefitinib处理后，抑制肿瘤坏死因子α诱导的AKT和IkB磷酸化。另外，Gefitinib显著地抑制NFkB转录活性和NFkB寡聚核苷酸结合。在另一研究，Gefitinib抑制P21激活激酶1活性。Gefitinib抑制EGFR诱导的细胞骨架结构的形成和体外侵袭等。另外，Gefitinib抑制EGF诱导的血管生成因子VEGF和IL-8的形成。在体内也可见抑制血管生成。Erlotinib,也叫Tarceva,OSI774,CP-358774是由OSI医药公司与Genetech公司研究中心开发的一个新的抗肿瘤化合物，为EGFR受体酪氨酸激酶强力的抑制剂。研究表明Erlotinib对EGFR受体酪氨酸激酶抑制的IC50值为2nM，为一可逆性的ATP竞争性抑制剂。用Src、Abl、胰岛素、胰岛素样的酪氨酸激酶作对照，发现该抑制剂对EGFR受体酪氨酸激酶的选择性超过1000倍。Erlotinib在体外对EGFR过表达的肿瘤细胞受体的自身磷酸化有明显抑制作用，其IC50值为20nM。同时，发现该抑制剂在体内外对EGFR过表达的上皮细胞肿瘤HN5和A431肿瘤具有明显抑制作用，其对肿瘤生长的抑制与对EGFR磷酸化抑制相符。II期和III期临床试验表明OSI774在150mg/d治疗化疗耐受的非小细胞肺癌，卵巢癌，头颈癌，抗瘤活性中等。主要的毒性是皮肤红疹和腹泻。57例化疗耐受的非小细胞肺癌的完全缓解率为1.8%，14%部分缓解，26%病情稳定。中位生存期为37周，1年生存率为48%。124例化疗耐受的头颈癌，6%部分缓解，40%病情稳定。34例化疗耐受的卵巢癌，6%部分缓解，50%病情稳定。PD0169414是由Parke-Davis医药研究所开发的一个不可逆性EGFR受体酪氨
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